羧基-琼脂糖凝胶4B的使用方法

  • 来源:上海吉至生化科技有限公司
  • 时间: 2020/6/30
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    产品简介

    羧基-琼脂糖凝胶4B是用由环氧树脂耦合方法将6-氨基已酸共价键偶联到琼脂糖4B上。羧基-琼脂糖凝胶4B含有一个10个碳原子连接臂自由羧基,耦合氨基基团的配体。长长的间隔臂使它特别适合固定的小分子。

    产品参数

    产品名称:羧基-琼脂糖凝胶4B (ECH Sepharose 4B)

    货号:AS9410

    基质:4%琼脂糖凝胶

    耦合基团:氨基

    颗粒大小:90μm

    最大流速:75cm/h

    工作pH:3-14

    操作温度:室温

    保存条件:贮存于4°C-8°C(保存溶液为20%乙醇)

    使用方法

    1.乙醇浸泡:在室温下,将干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小时,并不断搅拌以保证凝胶溶胀,用无盐水洗去残存的乙醇滤干;

    2.无盐水浸泡:室温下,在无盐水中充分溶胀24小时,间隙搅拌,以保证凝胶的完全溶胀,然后;

    3.盐酸浸泡:在常温下再用0.2NHCl浸泡12小时,间隙搅拌,滤干,水洗只中性;

    4.将溶胀好的凝胶脱气后(真空抽滤或超声波)根据装柱要求一次性置入柱内,注意保持湿态装柱,并避免柱内产生气泡或断层;

    5.上样前平衡层析柱至少3-5个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止(流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值);

    6.凝胶过滤的上样量一般为5%的柱床体积,我们建议初次上样控制在1-2%的床体积,视分离情况可以调整;脱盐时上样量可以达到20%的柱床体积,柱高的选择也与分离要求相关,柱高控制在40-50cm以下,过高的凝胶层会引起较大的反压,应当尽可能避免。难分离物质要有定柱高和流速控制,脱盐时高径比为5:1即可;

    7.洗脱方法:可以用无盐水,也可以采用上柱时的缓冲液洗脱;在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以完全分离纯化;
    8.在位清洗(CIP)凝胶使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。方法是以40cm/h用1M氢氧化钠反向洗四个柱体积,再以至少三个柱体积平衡缓冲液再生。

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