抗体的保存

  • 来源:福因德科技(武汉)有限公司
  • 时间: 2021/3/16
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    抗体纯化后,一般将其缓冲液置换成PBS,便于后期标记或其他用途使用,如果浓度太低,需要浓缩,抗体浓缩后浓度最好不要太高,太高容易引起沉淀。

    1. 抗体的浓缩

    1.1 透析袋浓缩

    将纯化的抗体装入透析袋中,透析袋表面覆满PEG20,000进行浓缩(不要用蔗糖浓缩)。

    1.1.2 超滤管浓缩

    将纯化的抗体转入15 ml的超滤管,3,500rpm离心12min左右(根据要浓缩的体积摸索离心时间)。

    2. 抗体浓度测定

    取适量抗体检测OD280nm的吸光度,读数不要超过2。如果读数超过2,再稀释,用吸光度读数除以1.35,再乘以稀释倍数即为抗体的大致浓度(mg/ml)。抗体的浓度(mg/ml)也可以用(OD280nm-0.35×OD495nm)/1.4这个公式计算。

    3. 抗体的保存

    3.1 纯化完的抗体推荐于PBS或者TBS溶液保存,可添加0.1%叠氮化钠防腐剂,但是叠氮化钠可能对下游实验中的辣根过氧化物酶产生抑制作用,作为免疫检测试剂开发的抗体一般使用有机化合物高分子防腐剂,避免对下游酶或者荧光染料的影响,如有需要可联系福因德生物。

    3.2 分装成小管,避免污染或者反复冻融,溶解时需要缓慢解冻,不可直接放热水急速解冻。

    3.3 存放抗体容器不要选择聚苯乙烯材料,可以选择玻璃或者对蛋白低吸附材料的管子。

    3.4 如果抗体要进行后期标记,最好在PBS中保存,不加防腐剂,短期内使用可放4℃,长期存放-20℃保存。

    3.5 如果抗体只做免疫学实验,不进行标记可以添加保护剂(1% BSA或海藻糖),还可以加30%~50%甘油,-20℃保存,此保存方法只适合下游直接使用(ELISA,IHC,WB),不适合对其进行标记开发,但其在-20℃不结冰,对抗体效价保存较好,并且使用时也不用反复冻融。

    3.6 冻干可以保存更长时间,但是同样要加入很多辅料保护剂,如:海藻糖、BSA,加了保护剂后期开发较难;也可以直接不加辅料保护,直接冻干,但效价损失大。

    3.7 不管用何种方法保存,应尽量分装成小管便于以后使用,抗体管上明确记录必要信息(名称、编号、时间,效价、纯化人等)并且要建立记录文档记录更详细的信息。

    (作为添加剂的BSA或者海藻糖一定要纯度好,不能含有蛋白酶,福因德生物长期致力于抗体稳定性研究,可以提供高品质抗体稳定添加剂。)

    货号

    产品名称

    规格

    产品特点与应用

    IGP0071

    海藻糖Trehalose(Protease   Free)

    100g/500g

    98%纯度,无蛋白酶

    IGP0072

    牛血清白蛋白 BSA(Protease   Free)

    100g/500g

    98%纯度,无蛋白酶

    IGP0073

    抗体专用防腐剂(Protease   Free)

    25ml/100ml

    新型防腐剂,不抑制酶活性

    IMR0201

    抗体稀释液

    100ml

    最大提高抗原抗体结合,同时降低非特异性结合背景问题。

    IMR0202

    HRP酶标抗体稀释液

    100ml

    最大提高抗原抗体结合,提高酶活性,降低非特异性酶底反应。

    IGP0075

    抗体保存液(Protease   Free)

    25ml/100ml/500ml

    即用型,稳定性好,避免抗体失活或者蛋白酶降解。