抗原免疫注意事项

  • 来源:福因德科技(武汉)有限公司
  • 时间: 2021/3/31
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    1. 纯度问题

    作为抗原,其纯度越高抗体的下游制备工艺会越简单:对于多抗来说,高免血清中针对目抗原的抗体分子越多更容易得到效价高、背景更低的抗体;对于单抗制备来说,就更容易筛选到特异性高效价的抗体分泌细胞株。

    2. 抗原毒性问题

    作为抗原的物质,对动物机体毒性越小越好;毒性大,动物容易死亡或状态不好,很难产生出高品质抗体。科研人员为了制备蛇毒蛋白的单抗,采用体外细胞免疫法(也叫细胞刺激免疫法):把脾脏B淋巴细胞取出体外培养,加入刀豆素刺激的同时加入抗原刺激B淋巴细胞致敏反应。

    3. 抗原溶剂问题

    抗原的溶剂一般选用PBS和生理盐水比较友好,但在抗原制备提纯的过程中不可避免的会引入一些去污剂[Triton,SDS或SKL(十二烷基肌氨酸钠)等]或其他有害化学试剂(如过量Tris等)。在免疫前这些物质不除去,动物免疫后会死亡,即使不死亡也会使动物机体受到剧烈刺激,免疫力严重下降。对于难溶蛋白(比如包涵体),可以溶解在低浓度尿素里面,因为动物可以耐受低浓度尿素。

    4. 佐剂问题

    佐剂的选择也是抗体制备方案中非常重要的环节,目前最主流的还是弗氏佐剂,由Freund最先研发出来,主要是用矿物油和糖类,弗氏佐剂又分不完全佐剂和完全佐剂:不完全佐剂里面加入卡介苗就是完全佐剂,用于初次调动机体免疫系统机能;弗氏佐剂主要是将水溶性的抗原物质包裹其中,形成一个抗原缓释仓库,源源不断刺激机体产生免疫反应。

    福因德生物技术团队开发出的FrdbioR水溶性佐剂,改变传统佐剂的思维模式,通过佐剂内高分子组分物理性吸附抗原达到缓释目的,同时含有可快速刺激免疫细胞分裂成分,双重效果助力抗体效价快速提升。由于其水溶性,不需要乳化,只要混匀即可免疫,减少乳化过程中浪费,对于珍稀抗原特别适合,其抗原使用量只为弗氏佐剂的1/5;同时对抗原的结构更为友好,特别适合于制备针对抗原构象的抗体。

    抗原设计是抗体制备方案设计的核心,目前用于蛋白抗体制备的最常用的手段和方法是重组蛋白和多肽,而重组蛋白中最常用的是原核重组表达蛋白,因为其简单易操作,产量高,抗原表位暴露充分,蛋白性质稳定而倍受青睐。本书将以原核重组蛋白和多肽抗原设计及抗体制备、纯化、标记等为具体实例,具体阐述抗体制备的全过程。

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