教你成为平淡无奇的WB小能手-结尾篇

  • 来源:北京索莱宝科技有限公司
  • 时间: 2021/5/11
  • 浏览人数: 704

     大家好,小编又又又来了。今天是WB最后一步了,抗体孵育到显影过程。

     

    01

    一抗孵育

     封闭结束前20min准备和所需一抗数量相等的孵育盒,在孵育盒上用记号笔标注出抗体编号及所需稀释比。按照规定的稀释比例进行抗体稀释。稀释比例建议预实验提前摸索或者根据抗体说明书上建议。

     封闭时间结束之后,倒掉封闭液,将稀释好的抗体加入到槽内,将摇床放入4℃展示柜孵育过夜。

     第二天将摇床搬出,平衡室温摇15min,倒掉一抗工作液,加入5mL TBST润洗膜一次,倒掉,加新的TBST洗膜5min,倒掉TBST,重复5次,此过程在摇床上进行。

     

    02

    二抗孵育

     在洗膜的过程中稀释二抗,确定好一抗的物种来源,选择相应的二抗进行稀释,稀释液为1xTBST。

     洗膜结束,倒掉TBST,尽量使孵育盒内无残留液体。然后加入二抗稀释液,孵育60min,此过程在摇床上进行。

     二抗孵育60min后,加入5mL TBST洗膜,“SPEED”档位调到50-60,洗膜5min,倒掉TBST,重复5次。

     

    03

    显影

    按照膜的大小,配置ECL发光液体积,将发光液放在PE手套上,充分混匀。将膜从孵育盒中夹出,用纸沾干,放入发光液中5秒后用纸沾干,放入成像仪中曝光成像。

     

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