那些年对于ELISA试剂盒检测数据的疑惑

  • 来源:北京索莱宝科技有限公司
  • 时间: 2021/8/27
  • 浏览人数: 700

        “隔壁的实验室又发了3篇SCI文章,我们还在处理数据,这几家的试剂盒检测数据怎么都不一样?”小编每当听到这句话,每次感受都不同。对那些努力钻研数据的学者、那些把青春献给实验室的研究生们表示深深的同情。那么,造成试剂盒检测数据不一样的原因,除了一些实验操作、实验环境等客观因素外,还有试剂盒质量参数,如重复率、板内差、板间差、线性稀释、回收率等。但是,最重要的影响因素可能是作为检测标尺的标准品。所以,下面我们就揭晓影响不同ELISA试剂盒检测数据的差异和关于标准品的几个疑惑


       不同的ELISA试剂盒如何进行校准?

       国际标准物进行校准


       目前,ELISA试剂盒校准方法为应用NIBSC/WHO推荐的标准品对试剂盒进行校准。


    主 页     


    1.jpg


    详 情 页     


    2.jpg


       高质量的原料进行校准


        ELISA试剂盒的检测指标种类可能远远多于NIBSC/WHO推荐的标准品,有时需要依靠高质量的ELISA试剂盒原料。目前,优质的进口原料(如重组蛋白作为标准品)依然是生产高质量ELISA试剂盒的前提条件之一,但是不同品牌的蛋白表达体系和质控标准不同,可能会导致原料的性能不同,进而造成检测数据的差异。


        严谨的生物样本进行验证


        随着国内生物技术的发展,自主研发蛋白表达、抗体制备、ELISA试剂盒开发技术也在不断进步。除了应用NIBSC/WHO推荐的标准品对试剂盒进行校准外,也可用一些暂无相关机构认可的生物样本进行验证,按照科学研究方法,对种属、性别、生命周期阶段、种类等因素划分所得到的生物样本进行验证。


    3.jpg

    生物样本验证ELISA试剂盒的试验数据



        重组蛋白-ELISA试剂盒标准品的选择


        目前,国内外的双抗夹心法ELISA试剂盒的标准品大多数属于重组蛋白,竞争法ELISA标准品更多样化,有可能为重组蛋白也可能为化学合成物质。为什么天然蛋白不用于作为标准品?双抗夹心法ELISA试剂盒选择重组蛋白为标准品的主要原因


       第一,天然蛋白均存在于复杂的生物样本中,大多数在细胞或组织中表达量可能较少,不能进行蛋白纯化或者成本高昂,无法获得大量的天然蛋白。


       第二,ELISA试剂盒检测基于抗体和抗原的特异性结合,在研究之初,通过重组蛋白进行免疫特定动物获得特定的单克隆或者多克隆抗体,因此,抗体和免疫的抗原存在高亲和力和高特异性。


       第三,随着蛋白表达技术的发展,重组蛋白和天然蛋白具有更高的相似度,特别是以酵母或细胞为代表的真核表达系统的发展,让真核表达的重组蛋白具有更多的空间构象和生物活性。



       ELISA试剂盒的标准品如何使用?

       如果ELISA试剂盒的标准品是重组蛋白,请提前20-30分钟从冰箱中取出试剂盒,平衡至室温(18-25℃),如果试剂盒需分多次使用,请仅取出本次实验所需的酶标板条和试剂,剩余板条和试剂需按照要求条件保存。


       标准品工作液的配制将标准品的冻干粉末尽量集中到西林瓶或离心管底部,加入标准品/样品稀释液至冻干标准品中,室温水平静置10分钟,让重组蛋白恢复其空间构象,然后上下颠倒数次,待其充分溶解后,轻轻混匀,避免起泡,然后进行分装和使用即可。


       标准品的保存和弃用如果1个月内使用,ELISA试剂盒标准品可以暂存于4℃;如果1个月以上不用,标准品必须保存于-20℃以下环境;已配制好的标准品工作液如有剩余液体请切记要弃用,标准品工作液一定要现配现用。


    索莱宝ELISA试剂盒研发平台



    4.jpg

    5.jpg

    6.jpg

    7.jpg

    8.jpg


北京索莱宝科技有限公司

地址:北京市通州区马驹桥镇联东U谷景盛南四街15号85A三层
邮政编码:101102
联系人:张净花
电话:010-50973129 13720003930
传真:010-56371281
Email:405465416@qq.com
展台:点击进入