超级核酸酶使用方法与注意事项

  • 来源:福因德科技(武汉)有限公司
  • 时间: 2021/9/8
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    1.超级核酸酶使用方法

    1.1大肠杆菌或者其他细菌样本处理

    细菌离心收集后,用10倍体积的TBS缓冲液重悬,菌体破碎后,每毫升菌体裂解液加入1-2微升超级核酸酶(若添加终浓度为5-10mM的Mg2+,则效果更佳),室温孵育30分钟,收集裂解液,离心取上清即可进行下游实验。

    1.2细胞样本处理

    1)贴壁细胞去除培养基,用PBS洗后,100微升RIPA裂解液(或其他哺乳动物细胞裂解液)加1-5微升超级核酸酶,室温孵育30分钟,收集裂解液,离心取上清即可进行下游实验。

    2)悬浮细胞离心收集后,在离心管中加100微升RIPA裂解液(或其他哺乳动物细胞裂解液)加1-5微升超级核酸酶,室温孵育30分钟,收集裂解液,离心取上清即可进行下游实验。

    1.3组织样本处理

    将30-100毫克动物或者植物组织研磨充分后,加入100-200微升裂解液,同时加入加1-5微升超级核酸酶,室温孵育30分钟,收集裂解液,离心取上清即可进行下游实验。

    2.超级核酸酶使用意事项

    1)避免使用磷酸盐缓冲液。

    2)含大量蛋白、细胞壁、其它盐分的粗制品,对该酶活性有部分抑制作用,使用时需要增加酶的用量。

    3)超级核酸酶有超强的试剂兼容性如:6M urea,0.1 M Guanidine HCl,0.4%Triton X-100,0.1%SDS,1 mM EDTA,1 mM PMSF,100mM DTT,当超过该浓度时核酸酶活性会降低,可通过增加核酸酶量使活性得到补偿。