Anti-Flag亲和纯化凝胶 ——IP/蛋白纯化好帮手 1产品概述 Anti-Flag亲和纯化凝胶(Anti-DYKDDDDK (Flag) Affinity Gel),主要用于带有Flag标签的融合蛋白免疫沉淀(IP)和纯化,其核心组分是抗体与凝胶组成的吸附剂。本产品选用高质量的鼠源IgG2b单克隆抗体,通过供价偶联的方式与Sepharose 4B gel形成紧密联系的吸附剂,能够特异性吸附Flag蛋白序列,得到高纯度的Flag标签蛋白。 « 目的蛋白载量高:载量≥1.1mg蛋白/mL凝胶 « 结合蛋白类型多:Met-FLAG–Protein,N端FLAG–Protein,C端FLAG-Protein « 填料质量硬:包被高质量的鼠源IgG2b单克隆抗体,浓度>7.5g抗体/L凝胶 « 性价比更高:进口一半的价格,一年节省50%科研经费 2产品原理 Anti-Flag亲和纯化凝胶的核心原理为亲和纯化技术:利用生物分子之间的特异性结合的作用进行生物物质的分离纯化,将鼠源IgG2b单克隆抗体与4%高度交联的琼脂糖凝胶通过供价偶联制备形成特异性吸附Flag蛋白序列的亲和吸附剂,将带有Flag标签的目的蛋白吸附到吸附剂上,然后选择合适的洗脱液将目的蛋白从吸附剂上解吸。具体流程图如下: 图1 Anti-Flag亲和纯化凝胶实验流程图 3产品优势 1)超高纯化效率 本产品具有超高的纯化效率,≥1.1mg蛋白/mL凝胶的载量,可满足所有实验要求。 图2 Yeasen Anti-Flag亲和纯化凝胶质检数据 Line 1:翊圣Flag-gel与E. coli裂解液混合纯化后电泳;Line 2:阴性对照 2)PK进口品牌S*M2 Flag-gel 高品质,高质量,与进口产品相比,同样不惧 图3 PK进口品牌S*M2 Flag-gel Line 1,2: 翊圣Flag-gel, 3×Flag peptide洗脱; Line 3,4: 翊圣Flag-gel, Gly-HCl洗脱; Line 5,6: S*M2 Flag-gel, 3×Flag peptide洗脱; Line 7,8: S*M2 Flag-gel, Gly-HCl洗脱 3)更高性价比 Yeasen致力于为您提供性价比最高的产品,Anti-flag亲和纯化凝胶可为您节约50%科研经费。 图4 Yeasen Anti-Flag亲和纯化凝胶产品与S品牌同级别产品价格比较 5常见问题 问题 可能原因 推荐解决方案 柱子反压过高 填料被堵塞 清洗树脂。 裂解液中含有微小的固体颗粒,建议上样前最好用0.22µm或0.45µm滤膜过滤,或离心去除。 样品太黏稠 样品中含高浓度的核酸,延长破碎时间直至粘度降低,或添加DNaseI (终浓度为5µg/ml),Mg2+(终浓度1mM),冰上孵育10-15min 缓冲液太黏稠 有机试剂或蛋白稳定试剂(如甘油等)可能会引起反压增高,降低操作流速。 洗脱组分中无目的蛋白 Flag标签蛋白变性了 使用温和的裂解条件,实验条件以经验为准。 过度的裂解使目的蛋白变性 Flag多肽失效 更换Flag多肽 目的蛋白聚集产生沉淀 在细胞裂解前溶液中加入DTT,终浓度为1-10mM 融合蛋白改变了Flag的构象,影响了目的蛋白的结合力 测定pGEX中Flag的结合力,对载体进行超声处理,检测其结合力。如果载体中Flag有很高的亲和力,有可能是改变融合蛋白的构象从而降低了Flag标签蛋白的亲和力。 降低结合温度至4℃,充分清洗。 目的蛋白没有完全洗脱下来 洗脱体积太少 增加洗脱液体积,减小洗脱流速。 洗脱液中Gly-HCl的pH 发生改变 使用新鲜配制的洗脱液 洗脱液孵育时间不够 增加洗脱液与凝胶的孵育时间 电泳或western blot检测中发现多条带 Flag融合蛋白已经发生降解 在裂解液中加入蛋白酶抑制剂,如加入1 mM PMSF 可能是蛋白酶对目的蛋白部分降解造成的,可使用蛋白酶缺陷型宿主菌(如lon-或ompT) 细胞破碎过度 减少细胞破碎时间,超声前加入溶菌酶(菌液体积的0.1倍10mg/ml溶菌酶,25mM Tris-HCl,pH8.0),避免发泡导致蛋白酶变性,过度超声破碎增加宿主内源蛋白与Flag融合目的蛋白的共纯化。 抗体与E. coli的各种蛋白反应 抗体吸附E. coli蛋白:Flag-抗体;超声处理去除Flag抗体,可以用Western Blot检测 6订购信息 产品名称 产品编号 规格 价格(元) Anti-DYKDDDDK (Flag) Affinity Gel(Anti-Flag亲和纯化凝胶) 20584ES01 100 μL 856.00 20584ES03 1 mL 1936.00 20584ES08 5 mL 6236.00 20584ES25 25 mL 27286.00 20584ES60 100 mL 96756.00 7相关产品推荐 His标签蛋白纯化 产品名称 载量(/mL填料) 最大压力 产品编号 规格(mL) 价格(元) HisSep Ni-NTA Agarose Resin (His标签蛋白琼脂糖高速纯化树脂) >40mg 6×His-tagged protein 0.1MPa, 1bar 20502ES10/50/60 10/50/100/1000 678/2848/5328/42686 HisSep Ni-NTA Agarose Resin 6FF (His标签蛋白琼脂糖高速纯化树脂) >40mg 6×His-tagged protein 0.3MPa, 3bar 20503ES10/50/60/80 10/50/100/1000 798/3358/5838/44686 HisSep Ni-NTA 6FF Chromatography Column, 5mL (His标签蛋白纯化预装柱,5 mL) >40mg 6×His-tagged protein 0.3MPa, 3bar 20504ES08/25 728/2938 HisSep Ni-NTA 6FF Chromatography Column, 1mL(His标签蛋白纯化预装柱,1 mL) >40mg 6×His-tagged protein 0.3MPa, 3bar 20505ES03/08 1/5×1 298/1048 Anti-His Affinity Gel(Anti-His标签亲和纯化凝胶) ≥0.6mg蛋白 —— 20589ES03/08/25/60 1/5/25/100 4356/13756/62786/189756 GST标签蛋白纯化 产品名称 载量(/mL填料) 最大压力 产品编号 规格(mL) 价格(元) GSTSep Glutathione Agarose Resin 谷胱甘肽琼脂糖树脂(用于GST标签蛋白纯化) >20mg GST protein(40kDa) 0.1 MPa,1bar 20507ES10/50/60/80 10/50/100/1000 928/3848/6898/48686 GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF 谷胱甘肽高速纯化树脂(用于GST标签蛋白纯化) >10mg GST protein(40kDa) 0.3 MPa,3bar 20508ES10/50/60/80 10/50/100/1000 1238/4568/7928/54686 GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column,1mL(GST标签蛋白纯化预装柱,1mL) >10mg GST protein(40kDa) 0.3 MPa,3bar 20509ES03/08 1/5×1 328/1348 GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column,5mL(GST标签蛋白纯化预装柱,5mL) >10mg GST protein(40kDa) 0.3 MPa,3bar 20510ES08/25 1/5×1 938/3928 MBP标签蛋白纯化 产品名称 载量(/mL填料) 最大压力 产品编号 规格(mL) 价格(元) MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF (MBP标签蛋白高度交联纯化树脂) >10mg MBP蛋白(80kDa) 0.3 MPa,3bar 20515ES08/25 5/25 858/2958 MBPSep Dextrin 6FF Chromatography Column, 1 mL (MBP标签蛋白纯化预装柱,1 mL) >10mg MBP蛋白(80kDa) 0.3 MPa,3bar 20516ES03/08 1/5×1 358/1258 MBPSep Dextrin 6FF Chromatography Column, 5 mL (MBP标签蛋白纯化预装柱,5 mL) >10mg MBP蛋白(80kDa) 0.3 MPa,3bar 20517ES03/25 5/5×5 1238/3958 HA/Myc/V5标签蛋白纯化 产品名称 蛋白结合量(/mL填料) 产品编号 规格 价格(元) Anti-HA Affinity Gel(Anti-HA亲和纯化凝胶) ≥0.6mg蛋白 20586ES03/08/25/60 1/5/25/100mL 4356/13756/62786/189756 Anti-Myc Affinity Gel(Anti-Myc标签亲和纯化凝胶) ≥0.6mg蛋白 20587ES03/08/25/60 1/5/25/100mL 4356/13756/62786/189756 Anti-V5 Affinity Gel(Anti-V5标签亲和纯化凝胶) ≥1.1mg蛋白 20588 ES03/08/25/60 1/5/25/100mL 4356/13756/62786/189756 更多产品敬请详询400-6111-883
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