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GST标签蛋白纯化预装柱,1ML翌圣生物科技(上海)股份有限公司

性能参数

产品名称: GST标签蛋白纯化预装柱,1ML
英文名称: GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 1ML
产品型号: 20509ES03
产品规格: 1ml
产品产地: 翌圣生物
品牌商标: Yeasen
价    格: 328元
更新时间: 2022/3/23 10:20:04
浏览人数:5384
诚信指数:1411点
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使用范围:仅限科研使用,不能应用于临床
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翌圣生物科技(上海)股份有限公司
地址:
上海市浦东新区天雄路166弄一号楼三层南单元
邮编:
200030
所在区域:
上海·浦东新区
电话:
400-6111-883、021-34615995-8075
传真:
021-34615995-188
联系人:
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产品详细描述

 

GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 1ML
GST标签蛋白纯化预装柱,1ML
产品信息
产品名称          
产品编号
规格
储存
价格(元)
GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 1ML
GST标签蛋白纯化预装柱,1ML
20509ES03
1ml
4
328.00
20509ES08
5×1ml
4
1348.00
产品描述
GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF是一种GST标签蛋白纯化树脂,可以一步纯化各种表达系统中谷胱甘肽-S-转移酶、谷胱甘肽依赖性蛋白和谷胱甘肽重组衍生物。在结构上,该树脂是以高度交联的4%琼脂糖凝胶为基质,通过12个原子的间隔臂,用化学方法共价结合还原型谷胱甘肽制作而成,具有更高的物理化学特性,可以耐受更高的压力,在相对较高的流速下,实现对目的蛋白的纯化,更适于工业大规模蛋白的纯化。
GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 1ML是装填了GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF的一种中压预装柱,规格1ml,预装柱具有标准接口,可以适配商品化的各类中压色谱系统,如ÄKTA 等,方便客户操作。
产品性质
基质(Matrix
高度交联的4%琼脂糖微球
配体(Ligand
通过12原子间隔臂偶联的谷胱甘肽
孔径(Bead size
45-165µm
载量(Capacity
10mg GST protein/ml 基质(40kDa
最大压力(PressureMax
0.3 MPa, 3bar
pH稳定范围(pH range
3-12
储存缓冲液(Buffer
20%乙醇
运输和保存方法
冰袋运输。4保存,有效期2年。
需准备试剂
所用水和Buffer在使用前最好用0.22µm0.45µm滤膜过滤除菌。
结合/洗杂缓冲液PBSpH7.4(140mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10mM Na2HPO4,1.8mM KH2PO4, pH7.4)
洗脱缓冲液50mM Tris-HCl, 10mM 还原型谷胱甘肽,pH 8.0
【注】:结合/洗杂缓冲液或者洗脱缓冲液中可加入1-10mM DTT
使用方法
【注】样品在上样前最好用0.22µm0.45µm滤膜过滤,减少杂质以防阻塞柱子。
1样品纯化(以Akta为例)
1准备:将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子,将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口,将预装柱接到色谱系统中,并旋紧。
2清洗3-5倍柱体积去离子水冲洗层析柱中储存液。
3平衡:5倍柱体积的结合Buffer平衡层析柱,使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。
4上样:将样品加到平衡好的层析柱中,推荐流速1ml/min,保证目的蛋白与树脂充分接触,提高目的蛋白的回收率,收集流出液,待检测。
【注】:样品的粘度增加使得即使上样体积很少,也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压,使得进样器更难使用。
5洗杂:10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗,直到紫外吸收达到一个稳定的基线,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液,待检测。
6洗脱:用洗脱Buffer 采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中,通常5倍柱体积洗脱液足够将目的蛋白洗脱下来。也可以用一个小的梯度,例如20倍柱体积或更多,来分离不同结合强度的蛋白质。
7清洗及保存:依次使用3倍柱体积的结合Buffer5倍柱体积的去离子水平衡填料,最后再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡,然后保存在等体积的20%的乙醇中,置于4度保存,防止填料被细菌污染。
2 SDS-PAGE检测
将纯化过程中得到的样品(包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等)利用SDS-PAGE进行检测,判定其纯化效果。
3 填料清洗
GST标签蛋白纯化产品可以重复使用而无需再生,但随着非特异结合蛋白的增多和蛋白的聚集,会造成流速和结合载量性能下降,此时需对填料进行清洗。
1)去除一些沉淀或变形物质
2倍柱体积的6M 盐酸胍溶液进行清洗,然后立即用5倍柱体积的PBSpH7.4清洗。
2)去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质
3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积1% Triton X-100清洗,然后立即用5倍柱体积的PBSpH7.4清洗。
注意事项
1)请勿冷冻保存本产品。
2)所有操作过程中,样本需要在4或冰上操作。
3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
附表问题及解决方案

问题
可能原因
推荐解决方案
柱子反压过高
填料被堵塞
清洗树脂。
裂解液中含有微小的固体颗粒,建议上样前最好用0.22µm0.45µm滤膜过滤,或离心去除。
样品太黏稠
样品中含高浓度的核酸,延长破碎时间直至粘度降低,或添加DNaseI (终浓度为5µg/ml),Mg2+(终浓度1mM),冰上孵育10-15min
缓冲液太黏稠
有机试剂或蛋白稳定试剂(如甘油等)可能会引起反压增高,降低操作流速。
洗脱组分中无目的蛋白
GST标签蛋白变性了
使用温和的裂解条件,实验条件以经验为准。
过度的裂解使目的蛋白变性
目的蛋白聚集产生沉淀
在细胞裂解前溶液中加入DTT,终浓度为1-10mM
融合蛋白改变了GST的构象,影响了目的蛋白的结合力
测定pGEXGST的结合力,对载体进行超声处理,检测其结合力。如果载体中GST有很高的亲和力,有可能是改变融合蛋白的构象从而降低了GST标签蛋白的亲和力。
降低结合温度至4,充分清洗。
柱子平衡时间太短,目的蛋白不是在pH6.5-pH8.0范围内结合
 

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