森贝伽生物:HP-1细胞培养建议

  • 来源:生物谷
  • 时间: 2022/8/4 13:34:00
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    一、细胞概述

    THP-1细胞系是1980年Tsuchiya等人建立的人单核细胞白血病细胞系。它来自一位急性单核细胞白血病患者的血液,有分化为多种巨噬细胞的能力,是各领域研究常用的细胞系之一。

    THP-1 细胞的特点

    喜欢酸性环境

    在偏酸性环境中,THP-1生长更快,所以当培养基稍微变黄(呈橘红色)时,是适合细胞生长的,此时补液或半换液即可。

    有密度依赖性

    THP-1细胞密度低时,生长较慢,培养密度维持在50万-100万细胞/毫升为宜;超过200万/毫升则需要传代。

    二、细胞培养条件

    三、细胞培养建议

    1、细胞复苏:将冻存管从液氮中取出后迅速放入37℃水浴锅中摇晃解冻,准备15ml离心管,将完全培养基移取6ml与细胞混合均匀,在1000RPM条件下离心3min,弃去上清液,再加入6ml完全培养基吹匀后重复离心3min,弃去上清液,补加6ml完全培养基吹匀。然后将细胞悬液加入T25培养瓶放入细胞培养箱(37℃,5%CO2)过夜,第二天检查细胞密度。

    2、细胞传代:当细胞密度达到约8x10^5cells/ml左右时,即可进行传代。由于是悬浮细胞,可直接将细胞吸出,离心之后传代。传代最少浓度不应少于1x10^5 cells/ml。如果用肉眼观察则将培养瓶平放静置后观察镜下细胞密度达到80%,即可进行传代。

    3、细胞冻存:50%RPMI-1640+40%FBS+10%DMSO 配置细胞冻存液或使用Biochannel细胞冻存液(,将培养瓶中细胞悬液抽出,在1000RPM条件下离心3min,弃去上清液。按照需求将配置好的细胞冻存液加入离心管中吹匀细胞,再分装冻存管中置于程序降温盒中在-80℃冰箱中过夜,次日放入液氮中保存。

    四、BioChannel 血清培养效果

    五、THP-1培养常见问题及解决方案

    Q: 培养过程中细胞发生贴壁怎么办?

    A: 少量细胞贴壁属于正常情况,将细胞悬液转移至新瓶中即可。当贴壁细胞的比例高于20%,说明细胞生长环境有异常,需排查培养箱设置、培养基成分,以及培养器皿是否异常。

    Q: 培养过程中细胞发生聚团怎么办?

    A: 少量细胞聚团,呈葡萄串状,属于正常现象,特别是细胞密度较低时,易出现这种情况。更换血清品牌或增大血清比例(不超过20%)有助于解决聚团问题。不建议将聚团的细胞吹散,等待密度高时,会自己分散开。

    Q: 培养基里一定要加β-巯基乙醇吗?

    A: β-巯基乙醇是一种常用的培养补充剂,有抗氧化的作用,可减少氧化应激对THP-1细胞的影响。当细胞密度过大但需要维持时,可适当增加巯基乙醇的比例(不超过标准量的1.5倍)。

    Q: 镜下观察时,难以聚焦或估算密度怎么办?

    A: 悬浮细胞会随着液体流动,不容易聚焦,静置5-10分钟使细胞沉底,之后再轻轻放上显微镜观察,将有助于聚焦和估算细胞密度。