土壤中性木聚糖酶测试盒/土壤中性半纤维素酶测试盒说明书(微量法)

  • 来源:生物谷
  • 时间: 2022/8/10
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    土壤中性木聚糖酶(Soil Neutral Xylanase,S-NEX)测定试剂盒说明书
     微量法100T/48S
    注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
    测定意义:
    木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生,能催化水解木聚糖,也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶,可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及 β-葡聚糖,降低酿造中物料的粘度,促进有效物质的释放,以及降低饲料中的非淀粉多糖,促进营养物质的吸收利用,因而广泛的应用于酿造和饲料工业中,NEX 一般分离自最适生长 pH 为 6-8 的微生物。
    测定原理:
    NEX 在中性环境中催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖,在沸水浴条件下进一步与 3,5-二**水杨酸发生显色反应,在 540nm 处有特征吸收峰,反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比,通过测定反应液在 540nm 吸光值增加速率,可计算 NEX 活力。
    自备实验用品及仪器:
    天平、常温离心机、震荡仪、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板。
    试剂组成和配制:
    缓冲液:液体 10mL×1 瓶,4℃保存。
    试剂一:液体 3mL×1 瓶,4℃避光保存。
    试剂二:液体 10mL×1 瓶,4℃避光保存。
    样品处理
    新鲜土样风干,过 30-50 目筛。
    测定操作表:
    1、 分光光度计/酶标仪预热 30min,调节波长至 540nm。
    2、操作表
    S-NEX 计算公式:
    a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
    标准曲线:y = 1.6904x + 0.0058,R2 = 0.9989
    酶活定义:50℃,pH6.0 条件下,每克土壤每天分解木聚糖产生 1μmol 还原糖所需的酶量
    为一个酶活单位。
    S-NEX 活力(μmol/d/g 土样)=(△A-0.0058)÷ 1.6904×V 反总×103÷ W÷T÷ 150
     = 28.4×(△A -0.0058)÷ W
    V 反总:反应总体积,0.15mL;T:反应时间,1/48d;1000:1mmol/L =103μmol/L;150:
    木糖分子量。
    b.用 96 孔板测定的计算公式如下
    标准曲线:y = 0.8452x + 0.0058,R2 = 0.9989 酶活定义:50℃,pH6.0 条件下,每克土壤每天分解木聚糖产生 1μmol 还原糖所需的酶量 为一个酶活单位。
    S-NEX 活力(μmol/d/g 土样)=(△A-0.0058)÷ 0.8452×V 反总×103÷ W÷T÷ 150
    = 56.8×(△A -0.0058)÷ W
    V 反总:反应总体积,0.15mL;T:反应时间,1/48d;1000:1mmol/L =103μmol/L;150: 木糖分子量。
    注意事项:
    1. 保证震荡反应 30min,使酶与底物充分接触。
    2. 注意 90℃水浴防止爆开,以免改变反应体系。
    仅用于科研,不能用于临床诊断!所有产品仅供科研使用,不得用于人或动物的治疗等任何其他用途,不为任何个人提供产品和服务。

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