活性氧 ROS 检测,实用 Tips - MedChemExpress

  • 来源:生物谷
  • 时间: 2022/11/28 15:10:00
  • 浏览人数: 1059

    活性氧 (Reactive Oxygen Species,ROS) 是生物有氧代谢过程中的副产物,是一类含氧并且性质活泼的物质的总称。ROS 的主要来源之一是线粒体内膜的呼吸链底物端。在有氧呼吸中,线粒体中的电子传递链复合物将电子传递给 O2,有一部分 O2 被还原,主要包括:超氧化物 (O2-)过氧化氢 (H2O2);单线态氧 (1O2);羟基自由基 (HO.);氢过氧自由基 (ROO.);氧化物过氧亚**阴离子 (ONOO-) 等。

    图 1. ROS 对细胞的影响

    HKSOX
    -1
    HKSOX-1 系列是对 O2- 具有极好选择性和敏感性的绿色荧光探针,可用于检测活细胞及体内的内源性超氧化物。HKSOX-1 (HY-130015)HKSOX-1r (HY-130017) 升级版,可更好滞留在胞内,反映胞内信号。HKSOX-1m (HY-D1156) 则可特异性靶向线粒体,用于监测线粒体内O2-

    图 2. 受精后斑马鱼胚胎中内源性 O2- 的共聚焦成像[1]

    HKOC
    1
    HKOCl 系列是以铑为基础、特异性检测 HOCl 的荧光探针。HKOCl-3 (HY-130025) 为绿色荧光探针,而 HKOCl-4 (HY-130027) 为黄色荧光探针,具有更长的吸收波长和更好的 pH 稳定性。HKOCl-4m (HY-D1158) 特异靶向线粒体,可用于监测线粒体内 HOCl。

    图 3. HKOCl-3 在多种细胞类型中检测内源性 HOCl[2]

    ROS
    染色实验简要流程
    (以
    HKOCl-3
    为例 )

    HKOCl-3染色液配制

    • 储存液的配制
    用 DMSO 配制 10 mM 的 HKOCl-3。如用 203 μL DMSO 溶解 1 mg HKOCl-3。
    (注:HKOCl-3 储存液建议分装后于 -20 ℃ 或 -80 ℃ 避光保存)
    • 工作液的配制
    用预热好的无血清细胞培养基或 PBS 稀释储存液,配制成 1-10 μM 的 HKOCl-3 工作液。
    (注:请根据实际情况调整 HKOCl-3 工作液浓度,且现用现配)
    • 细胞染色
    悬浮细胞:离心收集细胞,加入 PBS 洗涤两次,每次 5 分钟。
    贴壁细胞:弃去培养基,加入胰蛋白酶消化细胞。离心弃去上清后,加入 PBS 洗涤两次,每次 5 分钟。加入 1 mL HKOCl-3 工作液,室温孵育 30 分钟。400 g,4 ℃ 离心 3-4 分钟,弃去上清。加入 PBS 洗涤细胞两次,每次 5 分钟。用 1 mL 无血清培养基或 PBS 重悬细胞后,使用荧光显微镜进行观察。

    MCE 的所有产品仅用作科学研究或药证申报,我们不为任何个人用途提供产品和服务

    参考文献

    下滑查看更多↓

    1. Jun Jacob Hu, et al. Fluorescent Probe HKSOX-1 for Imaging and Detection of Endogenous Superoxide in Live Cells and In Vivo. J Am Chem Soc. 2015 Jun 3;137(21):6837-43.

    2. Hu JJ, Yang D, et al. HKOCl-3: a fluorescent hypochlorous acid probe for live-cell and in vivo imaging and quantitative application in flow cytometry and a 96-well microplate assay. Chem Sci. 2016 Mar 1;7(3):2094-2099.